摘要：中東呼吸綜合征冠狀病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的刺突蛋白(Spike,S)亞單位1(S1)是引起宿主免疫反應(yīng)和產(chǎn)生中和抗體的主要靶抗原,也是疫苗研發(fā)和病原檢測的重要靶標(biāo),選用適宜的真核表達系統(tǒng)高效表達S1蛋白是進行相關(guān)研究的基礎(chǔ)。為確定MERS-CoV S1在哺乳動物細胞中高效分泌性表達的信號肽序列,構(gòu)建了含高斯熒光素酶(Gaussia luciferase,GLuc)、人組織纖溶酶原激活劑(Tissue plasminogen activator,tPA)及小鼠免疫球蛋白G的2a亞型(Mouse immunoglobular G subtype 2a,MIgG2a)7個信號肽(原始序列和改造序列)序列的MERS-CoV S1表達質(zhì)粒,瞬時轉(zhuǎn)染細胞后,通過Western Blot檢測并比較細胞培養(yǎng)上清和裂解液中S1的表達水平及分泌表達效率(條帶密度灰度掃描比),并對哺乳動物細胞表達的S1蛋白的純度與抗原特性進行了分析。結(jié)果表明7種信號肽在293T、BHK21和ExpiCHO-S^TM三種細胞系統(tǒng)中介導(dǎo)MERS-CoV S1的高效分泌表達的效率各有不同,其中tPA-1信號肽介導(dǎo)S1抗原在ExpiCHO-S^TM中具有較高的分泌表達效率與產(chǎn)量,純化的S1蛋白保持了較好的抗原性。本研究為進一步研發(fā)基于MERS-CoV S1的亞單位疫苗及免疫學(xué)檢測試劑奠定了基礎(chǔ)。