摘要:目的 探討沉默炭疽毒素受體1(anthrax toxin receptor 1,ANTXR1)基因?qū)Ζ?珠蛋白基因表達(dá)的影響. 方法構(gòu)建ANTXR1 基因特異性序列的shRNA 重組質(zhì)粒及陰性對(duì)照重組質(zhì)粒,經(jīng)酶切驗(yàn)證及測(cè)序鑒定后,將干擾載體和慢病毒質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入293T 細(xì)胞后收集病毒上清液,再將其轉(zhuǎn)染至K562細(xì)胞中,并經(jīng)puromycin 篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株.通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)檢測(cè)各組ANTXR1 基因和γ珠蛋白基因mRNA 的表達(dá)情況;通過(guò)Western 蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)各組ANTXR1 蛋白和γ 珠蛋白的表達(dá)情況.采用t 檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析. 結(jié)果 獲得有效干擾ANTXR1 基因的K562 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光定量PCR 結(jié)果顯示,ANTXR1-shRNA 實(shí)驗(yàn)組中ANTXR1 基因和γ 珠蛋白基因mRNA 相對(duì)表達(dá)水平分別為0.19±0.02 和1.46±0.24;Western 蛋白印跡技術(shù)結(jié)果顯示,蛋白相對(duì)表達(dá)水平分別為0.20±0.01和1.45±0.14.ANTXR1-shRNA 實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組、空質(zhì)粒載體組和空白對(duì)照組相比,ANTXR1 基因相對(duì)低表達(dá),γ 珠蛋白基因相對(duì)高表達(dá),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ﹤ 0.05). 結(jié)論靶向沉默ANTXR1基因后,促進(jìn)γ 珠蛋白基因mRNA 和蛋白水平的表達(dá).
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