甘薯IbSSI基因啟動子序列的克隆及瞬時表達(dá)分析

作者:王雁楠; 楊育峰; 楊國紅; 張莉; 陳獻(xiàn)功; 徐心志; 劉慶昌; 翟紅; 何紹貞 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所; 鄭州450002; 中國農(nóng)業(yè)大學(xué); 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部甘薯生物學(xué)與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 北京100193

摘要:植物可溶性淀粉合成酶(soluble starch synthase, SS)在植物支鏈淀粉的合成中起著關(guān)鍵作用,其主要負(fù)責(zé)支鏈的延伸。前期我們從甘薯中克隆到IbSSI基因并對其進(jìn)行了表達(dá)分析及功能驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)該基因在甘薯中的表達(dá)受到外源蔗糖的誘導(dǎo)以及晝夜節(jié)律的調(diào)控。本研究在此基礎(chǔ)上利用染色體步移法克隆到IbSSI基因1 811 bp的啟動子序列。PlantCARE在線分析表明IbSSI啟動子序列富含TATA-box和CAAT-box兩個基本元件,還含有與晝夜節(jié)律、光照、蔗糖、逆境響應(yīng)及組織特異表達(dá)等相關(guān)的順式作用元件。將IbSSI基因全長啟動子及其6個啟動子5’端缺失片段分別替換植物表達(dá)載體pBI121的CaMV 35S啟動子并在本生煙草(Nicotiana benthamiana)葉片中進(jìn)行瞬時表達(dá)。GUS染色結(jié)果表明不同長度片段的啟動子驅(qū)動β-葡萄糖醛酸酶基因(GUS)表達(dá)的能力有所差異,其中-200 bp~-369 bp區(qū)段以及-1 015 bp~-1 304 bp區(qū)段可能存在著增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄的重要順式作用元件。本研究揭示了IbSSI基因受外源蔗糖誘導(dǎo)表達(dá)及晝夜節(jié)律調(diào)控的原因,并為進(jìn)一步闡明IbSSI基因在甘薯淀粉生物合成中的作用提供了科學(xué)依據(jù)。

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