時間：2023-08-30 16:26:45
序論：在您撰寫海綿城市的建議時，參考他人的優(yōu)秀作品可以開闊視野，小編為您整理的7篇范文，希望這些建議能夠激發(fā)您的創(chuàng)作熱情，引導您走向新的創(chuàng)作高度。
關鍵詞：海綿城市；城市環(huán)境；作用及淺析
引言：主席高度重視城市化發(fā)展的質量，并且發(fā)表了“加強海綿城市建設”的講話，明確指出要大力構建“海綿城市”。目前海綿城市理念在多個發(fā)達國家，如美國、加拿大、新加坡、日本等都發(fā)揮了巨大的功效，我國海綿城市理念的提出相對較晚，要善于借鑒發(fā)達國家的成功經(jīng)驗。建設海綿城市，是實現(xiàn)城市建設和自然生態(tài)系統(tǒng)協(xié)調發(fā)展重大舉措，從根本上解決“城市病”，推動我國城市發(fā)展早日走上生態(tài)化、持續(xù)化的道路，實現(xiàn)城市發(fā)展的可持續(xù)。
一、海綿城市的概念和特征
1.海綿城市的概念
我國《海綿城市建設技術指南―――低影響開發(fā)雨水系統(tǒng)構建》中對海綿城市的概念進行明確了定義：指城市能夠像海綿一樣，在適應環(huán)境變化和應對自然災害等方面具有良好的“彈性”，下雨時吸水、蓄水、滲水、凈水，需要時將蓄存的水“釋放”并加以利用。在這一“吸”一“收”的過程中實現(xiàn)了城市內部良性的水循環(huán)系統(tǒng)，還能自動吸收水系統(tǒng)的污染物質，保持城市水土。
2.海綿城市的特征
第一，注重城鎮(zhèn)化和自然環(huán)境的協(xié)調發(fā)展，在對城市地下水、自來水等進行存儲、排放、使用時不是依靠傳統(tǒng)的地下管道而是依靠城市自然環(huán)境綜合利用各種措施吸收、存儲大氣降水和地下水，進而緩解城市的洪澇問題；第二，讓城市“彈性適應”環(huán)境變化與自然災害，海綿城市建設思路不僅注重恢復和保持城市內部的水系統(tǒng)，更注重原有自然生態(tài)系統(tǒng)的保護，重視城市系統(tǒng)的自我調節(jié)；第三，轉變了排水防澇思路，海綿城市徹底摒棄了“快排式”傳統(tǒng)的排水模式，在城市排澇過程中始終堅持“滲、滯、蓄、凈、用、排”的六字方針；第四，開發(fā)前后的水文特征基本不變，海綿城市構建了一個良性的水系統(tǒng)。
二、分析“海綿城市”對城市環(huán)境的作用
根據(jù)《指南》的相關規(guī)定，海綿城市建設規(guī)劃實施的主要內容包括以下幾點：：一是充分保護城市原有生態(tài)系統(tǒng)；二是對已經(jīng)受到破壞的自然環(huán)境及水體進行修復；三是低影響開發(fā)。海綿城市的建設對解決城市內澇問題、調節(jié)地下水、凈化水中污染物質、維護自然生態(tài)環(huán)境的多樣性、美化城市環(huán)境等發(fā)揮了巨大功效。
1.緩解城市內澇問題
海綿城市建設理念在城市發(fā)展過程中的應用，起初就是從解決城市雨洪問題出發(fā)，發(fā)揮著雨洪調蓄、雨水資源收集利用與地下水涵養(yǎng)等作用，完善城市雨水管理體系。海綿城市的建設，改變了以往單純使用市政地下排水管道和泵站的現(xiàn)狀，側重于依靠城市自然生態(tài)系統(tǒng)來吸收、存儲、排放降水，綜合利用自然生態(tài)調節(jié)和人為調節(jié)措施來緩解城市內澇問題。
群力雨洪公園是海綿城市建設理念運用的一大成功案例。該區(qū)域在歷史上是洪澇災害多發(fā)區(qū)，在對其進行設計的過程中，以保護濕地為原則，巧妙的將其打造成收集雨水、儲蓄雨洪、下滲雨水、補充城市地下水、涵養(yǎng)水源、凈化水中污染物質、增加生物多樣性等功能于一體的濕地公園。在具體實施的環(huán)節(jié)中，盡量保持原有的濕地區(qū)域，群力雨洪公園成功的運用了海綿城市建設理念，濕地公園的開發(fā)，為調節(jié)濕地公園的生態(tài)系統(tǒng)發(fā)揮了巨大的作用。
群力雨洪公園的成功案例實現(xiàn)了緩解城市內澇帶來的問題和危害，增強城市排水系統(tǒng)的能力，通過協(xié)調市政道路和地下排水管之間的關系，增大城市的綠色植被覆蓋率，完善城市水系統(tǒng)等措施來達到排澇的目的，確保在雨季時城市市民依然享受安逸的生活。
2.形成良性的水循環(huán)系統(tǒng)
海綿城市的建立，不僅有效的減輕城市洪澇災害，還能夠緩解我國水資源不足、水質惡化的局面，為建立良性的水生態(tài)系統(tǒng)提供助力。
武夷新區(qū)踐行“海綿城市”在此方面取得了非常成功的效果。其主要理念體現(xiàn)在以下幾個方面：一是注重對森林生態(tài)的修復工作，閩北地區(qū)原生態(tài)的森林在被人為的濫砍亂伐之后正呈現(xiàn)急劇下降的趨勢，鼓勵當?shù)亓洲r還林于上，加大對林業(yè)種植的補貼力度；二是城市生態(tài)修復同樣不可忽視，一些貼近地面的建筑如廣場、硬地、建筑等工程在材料的選擇上采用通氣、透水性較好的；三是恢復和修復自然生態(tài)環(huán)境，保持生態(tài)物種的多樣性，擴大生態(tài)用地的面積，凈化水資源，淡化水質，減少暴雨對城市的影響。
筆者認為，海綿城市就像被放大了的“濕地”一樣，最大程度的修復城市原有的水生態(tài)系統(tǒng)，注重開發(fā)雨水的滲透、調蓄、凈化、利用等綜合作用，實現(xiàn)雨洪資源的有效利用，使地表徑流和地下徑流維持著一定的徑流量。森林植被、濕地等大大提升地下水的涵養(yǎng)能力，凈化水質，吸收水中的污染物質，確保居民生產和生活用水的安全性，促進雨水資源的利用和生態(tài)環(huán)境保護，同時實現(xiàn)地表水、地下水和自然降水三者之間的平衡循環(huán)。
3.保持城市水土
不可否認，城市水土保持是實現(xiàn)涵養(yǎng)水源、防風固沙、提供動植物棲息地等的關鍵，而海綿城市的建設，又能夠給城市水土保持工作的雨水控制環(huán)節(jié)提供便捷。在建設海綿城市的過程中，做到了開發(fā)前后的水文特征基本不變，始終堅持低影響開發(fā)的原則，城市水土保持離不開對雨水的控制。
比如，我國投資建設的重慶海綿城市，其建立了完整的防水控制，也因為重慶地處高原，山地較多，在進行海綿城市建設的時候發(fā)展了綠化工程，讓綠色植被對城市的水土進行保持。雨水較多季節(jié)植被能夠吸收水分，保持水源，對于雨水能夠做到有效控制。并且，綠色植被與重慶城市的人文特征相符，也是海綿城市與其人文氣息相得益彰構建之處。
鑒于此，筆者從海綿城市建設和城市水土保持出發(fā)提出以下建議：一是結合海綿城市建立起合適的雨水控制利用設施，做到真正的系統(tǒng)優(yōu)化；二是加強對水土保持工作的監(jiān)測，糾正雨水控制期雨水控制的不當之處；三是注重低影響開發(fā)理念和水土保持臨時排水措施相結合；四是政府部門要積極引進和開發(fā)雨水利用控制系統(tǒng)的新工藝、新技術、新手段等。
4.改善城市的人文和自然景觀
在實施“建設海綿城市”的規(guī)劃策略時，對居住區(qū)和城市道路進行分割，增大了建設綠地的用地面積，合理的修建了廣場，廣場鋪裝多采用透水式鋪裝，城市道路人行道也采用了透水式鋪裝的方法，增強了城市內部的水循環(huán)系統(tǒng)；另外，城市內濕地、公園面積增大，提供了良好的生態(tài)環(huán)境。
比如，嘉興海綿城市的建設，便是對居住區(qū)和城市道路進行有效規(guī)劃，開墾綠地面積，增加綠化建設，讓百姓在享受到其“海綿”作用的同時還能夠欣賞到美麗景色，增添了城市的人文氣息，美化了城市的自然景觀，可以說是一箭雙雕。嘉興海綿城市建設是全國海綿城市建設的標桿，也得到了全國各地的爭相效仿。
結語：
海綿城市的建設是實現(xiàn)城市化和自然生態(tài)系統(tǒng)協(xié)調發(fā)展的有效途徑，有力克服了城市化發(fā)展過程中的問題。當前，無論城市規(guī)模的大小，建設海綿城市已經(jīng)是大勢所趨，其推動了新型城鎮(zhèn)的建設，在城市化發(fā)展中貫徹落實了以人為本的思想理念。
參考文獻
[1]仇保興. 海綿城市（LID）的內涵、途徑與展望[J]. 給水排水，2015，03：1-7.
關鍵詞：海綿城市；生態(tài)環(huán)境；雨水花園
中圖分類號：S26文獻標識碼：A文章編號：16749944（2016）18016203
1引言
中國是水資源嚴重匱乏的國家之一，水資源人均占有量不足世界人均水平的1/3。近年來，隨著城市化進程的不斷加快，水資源短缺和污染問題在城市發(fā)展過程當中尤為突出。在城市生態(tài)系統(tǒng)中，某些城市存在城市供水不足，城市建設用水安全等問題，而有些城市的工業(yè)污水也造成城市生態(tài)系統(tǒng)惡化，生活用水得不到保障[2]。因此，合理有效地利用水資源，緩解城市用水壓力，優(yōu)化水資源利用、排放、凈化模式就成為社會各界廣泛關注和研究的重點問題。基于此，本文就針對海綿城市建設過程對雨水的處理利用問題進行分析，并提出一些合理化意見和建議[3]。
2海綿城市的內涵
海綿城市是指在城市發(fā)展建設過程中，充分發(fā)揮道路、城市水系、建筑以及綠地等設施對雨水的吸收、滲透、儲存、凈化和緩解作用，控制雨水徑流，如同“海綿”一樣，對于環(huán)境的變化和突發(fā)的自然災害等方面具有良好的適應性，也就是“彈性”?！昂＞d城市”一詞的提出是在新時期下，為了緩解和解決我國飛速發(fā)展的城市化與脆弱的城市水體矛盾而提出的，“滲、蓄、滯、用、排”五位一體，落實：“節(jié)水優(yōu)先、空間均衡、系統(tǒng)治理、兩手發(fā)力”的原則。
海綿城市的發(fā)展理念在國外提出較早，主要思想是解決城市雨水問題，它包括：低影響開發(fā)（LID）、最佳管理措施（BMP）、綠色基礎設施（GI），相關理論研究的目的是有效控制農村以及城市的面狀污染源＼[3、4＼]，隨后逐漸發(fā)展成為控制降雨徑流量和水質的生態(tài)可持續(xù)的綜合性措施。而其中又以低影響開發(fā)理論為核心，即基于生態(tài)文明和景觀建設為主的雨水管理方法，主要是在一定的區(qū)域內利用軟工程技術，通過植被自身的特點實現(xiàn)就地處理降水，直接減少地表雨水徑流量[5]。也就是說從源頭控制雨水徑流，其具體的方法包括建設雨水花園、綠色屋頂、城市下凹綠地等設施；發(fā)揮城市綠地、道路、建筑對雨水的吸收、蓄存和緩釋作用，有效改善城市內澇，削減地表徑流，改善城市的生態(tài)環(huán)境[6]。
3海綿城市建設過程中應注意的主要問題相對于國外而言，我國海綿城市建設起步較晚，目前處于試點階段[7]。但“海綿城市”的發(fā)展理念已成為新型城市價值轉型的重要標志以及實現(xiàn)人與自然和諧共處的必經(jīng)之路。正因為如此，在其發(fā)展過程中應該注意以下幾個問題。
3.1海綿城市的建設要以保護城市生態(tài)系統(tǒng)為前提
雨水降落到地表以后，經(jīng)過截留、滲透、調蓄形成地表雨水徑流，最后流入?yún)R渠。其中，滲透過程和地表雨水徑流管理是核心問題，其影響因素為地表植被土壤和地面坡度大小。在提出海綿城市建設理念之前，城市規(guī)劃考慮更多的是用地功能，對于雨水主要考慮的是排泄，即地下管網(wǎng)基礎設施建設，而對于路面建設等，則是人為地割裂了雨水與地下的天然聯(lián)系。在城市開發(fā)過程當中不透水的硬質路面會導致徑流系數(shù)增加＼[8、9＼]，通常情況下，林地的徑流系數(shù)約為0.1～0.2，農田地的徑流系數(shù)為0.5～0.6，城市的徑流系數(shù)一般為0.9～1.0。因此，降水到達地表后難以下滲，形成了地表徑流，造成了城市內澇。海綿城市就是克服了以往的不足，將雨水利用的幾個基本功能綜合起來進行考慮[10]。不過，在海綿城市建設過程中，對雨水的截留和調蓄設施是建設重點，在建設過程中，應充分尊重自然環(huán)境變化規(guī)律，最大限度地保護城市生態(tài)系統(tǒng)[11]。
3.2海綿城市建設應充分認識南北方自然環(huán)境差異
南北方城市建設差異較大，在進行海綿城市建設的過程當中，需結合城市的地理環(huán)境因素，具體情況具體分析。從宏觀建設角度出發(fā)，南北方城市開發(fā)的著重點有所不同。對于北方城市來說，降雨量小，蒸發(fā)量大，如何存蓄更多的降水、并能及時地加以再利用是關鍵問題[10]。而南方城市因降雨量較大，河流、湖泊眾多，排洪量遠小于降水積蓄量，造成了地表徑流，容易誘發(fā)城市內澇。因此，在進行海綿城市建設過程中應該因地制宜，選擇合適的建設方案[12]。
3.3做好基礎性研究和合理規(guī)劃論證工作
對當?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境、城建分區(qū)應該注重基礎性的研究和合理規(guī)劃，這樣才能使海綿城市建設具有系統(tǒng)性、基礎性的準備，也會讓海綿城市建設適應當?shù)氐淖匀画h(huán)境和社會發(fā)展的需要。很多城市都將海綿城市的建設納入城市基礎設施建設的范疇之內，但是，如果海綿城市的規(guī)劃不合理，將會導致城市功能區(qū)混亂，綠色海綿設施之間無法協(xié)調，喪失了海綿的“彈性”功能。如果對當?shù)刈匀坏乩砀艣r缺乏全面研究的話，更會使綠色海綿設施無法充分解決城市水體問題，嚴重的會使海綿城市建設徒勞一場。
4建議和對策
4.1大力提高城市的植被覆蓋率
海綿城市的建設過程中，應大力提高城市的植被覆蓋率?；驹瓌t是城市生態(tài)建設和自然力的復原 ＼[8，11＼]。而傳統(tǒng)的城市發(fā)展理念強調城市的經(jīng)濟職能和社會職能，以“堅固耐用、經(jīng)濟美觀”為原則，忽視了城市水體涵養(yǎng)功能和生態(tài)環(huán)境的作用，在建設中偏離了正確的發(fā)展模式。例如，硬質的街道不利于雨水的下滲，不合理的溝渠開發(fā)，城市河道縮減，對湖泊等水體圍填侵占等。因此，建設海綿城市就需要增加綠化面積，從環(huán)境保護入手，改善城市生態(tài)系統(tǒng)[15]。地表綠化是對降水的就地直接吸納，這是發(fā)揮城市“海綿”功能的最重要的一步。海綿城市的建設不僅僅是一個工程問題，更是一個環(huán)境問題。從工程學的角度來看，工程手段可以提高對降水的利用率，而從城市生態(tài)環(huán)境保護的角度出發(fā)，才能從開發(fā)戰(zhàn)略、指導思想上徹底轉變思路，把海綿城市的建設當作永久性的，戰(zhàn)略性的事業(yè)去發(fā)展＼[15、16＼]，總體來說就是要保證城市綠地的覆蓋面積并使其得以有效保護，例如江蘇省城區(qū)用地規(guī)劃就充分考慮了這些特點。
4.2重視地理環(huán)境要素，將蓄水和雨水再利用作為重點針對南北方差異問題：在北方進行城市基礎設施建設時，應將蓄水、降水再利用作為開發(fā)的重點。例如哈爾濱群力雨洪公園，就合理地解決了雨水的收集、調蓄、排泄，不僅合理利用了雨水資源，而且較好地解決了水污染問題。通過簡單的挖方和填方，緩解低洼地積水問題，實現(xiàn)高地與低地相結合，高地種植旱生植被、低地建設魚塘并種植喜濕植被，建設新穎的農業(yè)景觀＼[17，18＼]，緩解雨洪壓力。此外，公園四周建造大小不一的水坑，收集城市降水，經(jīng)過自然匯集、過濾后在低洼地匯聚供給魚類飼養(yǎng)，將多余降水轉移到調蓄地區(qū)，尤其是城市污水，在向異地轉移過程中實現(xiàn)過濾和匯集來解決城市水污染問題＼[18，19＼]，建立發(fā)達的地下管渠，實現(xiàn)蓄水地區(qū)與城市之間水體的自由調動。
對于南方城市建設而言，由于降水較多，應采用降水就地吸納的方式，如貴州六盤水明湖濕地公園的建設理念就是典型代表，其核心是通過減緩城市排水速度來實現(xiàn)“海綿性”，傳統(tǒng)的城市排水排洪工程主要以快速排水為主，而新型海綿城市的建設打破了這一束縛，明湖濕地公園位于市區(qū)內，通過恢復水城河兩岸的植被減少地表徑流，增加水體中的氧氣含量。種植各種植物，促使富營養(yǎng)化的水體被生物吸收，緩解城市水體污染，同時，建立梯田式濕地＼[20，21＼]，有效的減緩地表徑流、削減洪峰、調節(jié)季節(jié)性降雨和城區(qū)空氣質量＼[22，23＼]。
4.3加強海綿城市建設的基礎性研究，完善相關政策
在海綿城市的建設之初，要對該城市自然地理概況做出分析，如城市地貌特征、降水量、地下水水情、地質概況等，這也是海綿城市建設的基礎工作，具有海綿效應的城市綠色設施，如對綠色屋頂、冠層截流、綠色街道、生態(tài)溝、雨水花園、蓄水池等建設做到心中有數(shù)。
在保障措施上，首先要制定相關的規(guī)章，出臺相應的指導意見，引導各地區(qū)建設符合本地區(qū)的具有可操作性的建設方案，并將海綿城市建設納入法律體系，通過法律來保證海綿城市建設的落實和維護＼[15，24＼]。轉變城市發(fā)展的觀念，將城市發(fā)展和自然融為一體，劃分合理的城市功能，實現(xiàn)城市建筑、排水、水利工程等多方面的銜接＼[25，26＼]。
5結語
本文主要闡述了海綿城市的概況、提出背景以及國內外發(fā)展現(xiàn)狀。探討在進行海綿城市建設過程當中應該注意的幾個問問題，這些問題是不同角度、不同的發(fā)展階段對海綿城市建設的基本要求。影響海綿城市發(fā)展的問題主要為自然環(huán)境因素，明確自然環(huán)境與基礎設施建設之間的相互關系，可以促進海綿城市的發(fā)展，實現(xiàn)人與自然的和諧共處。
參考文獻：
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[3]吳丹潔. 中國特色海綿城市的新興趨勢與實踐研究[J]. 中國軟科學，2016（1）： 79～97.
【關鍵詞】 海綿城市 給排水建設 注意問題
隨著世界環(huán)境的逐漸惡化以及城市建設的需要，越來越多的城市開始建造海綿工程，提升城市應對雨水的能力，留住雨水資源，為城市供水做出貢獻。但是，我國的海綿工程建設的能力還存在不足，建設過程中存在的問題較多，為此，本文結合筆者的工作經(jīng)驗，闡述海綿城市給排水建設中需要注意的問題和相應的建議，以期為我國的城市建設做出貢獻。
1 海綿城市給排水建設的意義
1.1 提高環(huán)境適應能力
眾所周知，我國土地面積廣闊，既有較為干旱的西北地區(qū)，又包含雨水充足的沿海地區(qū)，同時，隨著氣候環(huán)境的不斷變化，我國城市大多會經(jīng)歷雨水的考驗，當雨水量較大時，城市的排水壓力會比較大，大多數(shù)城市會出現(xiàn)內澇問題，為此必須要做好給排水建設工作，提升城市應對風險的能力。我國目前開始建設海綿工程，其主要的作用是提升環(huán)境適應能力，降低雨水的不良影響，保留雨水資源，利用防、排、蓄、滲、滯等方法，不但可以減少內澇問題的產生，同時還可以有效提高水資源利用效率[1]。
1.2 恢復受損害水體
海綿工程的作用不僅在于提升環(huán)境適應能力，其還能有效地恢復和凈化受損的水體，在海綿工程中，通過利用專業(yè)的技術和自然途徑，能夠將自然水文特征維持在城市開發(fā)前狀態(tài)，提高對城市原有生態(tài)系統(tǒng)的保護效率。海綿工程中的生態(tài)手段對粗放式城市建設環(huán)境進行優(yōu)化，能夠恢復前期受損壞的水體，使其能夠降低污染程度，在海綿工程的給排水建設工作中，應當首先對城市的水體情況進行細致的檢查，找出問題較為嚴重的區(qū)域，并集中加快海綿工程建設，提升水體的恢復速率，政府部門應當將海綿工程與其他的工程進行聯(lián)合。
1.3 提高水資源利用率
由于客觀環(huán)境的限制，我國大多數(shù)地區(qū)處于缺水的狀態(tài)中，但是，我國城市建設正處在高速發(fā)展的階段，對水資源的需求非常強烈，如果僅靠地下水源，很難滿足發(fā)展的需要，為此，我國城市需要更多的水資源供應渠道，保障城市建設順利進行，其中，海綿工程能夠有效地提升水資源的利用率，讓水資源通過自然滲透、自然積存以及自然凈化等過程，重新被人們所利用，從而降低城市建設的成本，提高城市發(fā)展的速度。
2 海綿城市給排水建設存在的問題分析
2.1 依據(jù)科學性低
目前，我國在海綿城市的建設方面經(jīng)驗較少，發(fā)展的思路主要來源于少數(shù)的科研單位和政府部門，因此導致我國海綿城市的科學性較差，這也導致我國海綿城市在運營過程中出現(xiàn)諸多問題，水資源的利用效率并沒有明顯的提高。這說明，科學程度對海綿城市的建設尤為重要，每個城市在建設過程中，要結合自身城市的特點，做好給排水的規(guī)劃和方案，掌握各項建設指標，尤其是要做好水量預測與水平衡分析。
2.2 排水體系不合理
雖然現(xiàn)如今我國城市的建設速度不斷加快，但是，我國城市發(fā)展的時間較短，發(fā)展的經(jīng)驗相對不足，其中給排水建設工作一直為社會所詬病，例如我國大多數(shù)城市使用的雨水分流機制應用效率非常低，尤其是在西北地區(qū)，雨水管道長時間閑置，而且雨水資源往往是直接排放到目的區(qū)域，造成資源嚴重浪費。因此，我國的海綿城市應當避免上述問題，實現(xiàn)對雨水的分流儲存，使得雨水資源得到有效的利用[2]。
2.3 給排水體系影響大
我國的城市建設者已經(jīng)認識到地下設施建設的必要性，隨著時代的發(fā)展，地下的構筑物數(shù)量逐漸增加，城市的給排水系統(tǒng)更加優(yōu)化，但是其對城市的影響也隨之增大，同時現(xiàn)有供水管道長度、 質量以及建設等方面均存在一定的不足，并不能完全滿足城市建設需求。因此，在海綿城市的建設過程中，應當對給排水系統(tǒng)的規(guī)劃設計進行優(yōu)化，降低其建設對已存自然水體系的影響。
3 對海綿城市給排水建設提出的建議
3.1 基于具體情況進行給排水建設
我國土地面積廣闊，這也導致我國城市的具體情況各不相同，為此，在海綿城市的建設過程中，應當結合自身的實際情況，避免盲目地學習其他城市的成熟經(jīng)驗，要做到因地制宜。例如濟南海綿工程中，其主要的海綿道路分布在城市的南邊，這是因為濟南以“泉城”而聞名，其需要雨水作為補充，而且濟南的南邊地勢較高，海綿工程中的水資源能夠逐漸滲透到泉水聚集區(qū)，從而滿足泉水噴涌的需要。
3.2 注重專業(yè)性技術方面的研究
海綿城市的給排水建設工作是城市基礎設施建設的重要內容，為了提高建設的質量，相關單位應當加強專業(yè)性技術的研究，提升技術的科技水平，保證建設出的海綿工程具備較好的質量，使用更長的時間，尤其是在海綿城市的建設目前處于初級階段，一定要一邊建設一邊摸索著前進，無論是相關政策還是施工經(jīng)驗均比較少，對系統(tǒng)設計提供的依據(jù)支持較低，因此具有很強的不確定性。
3.3 落實責任體系機制
海綿城市的建設過程比較漫長，而且我國在這方面的經(jīng)驗較為缺乏，在建設工作中，一定要將責任進行明確，落實責任體系機制，以現(xiàn)有的基礎設施為對象，對其進行統(tǒng)籌分析、規(guī)劃與設計，提高各類基礎設施運行的安全性，且滿足其與給排水系統(tǒng)協(xié)調運行的要求。
總之，海綿城市是未來一段時間內我國城市建設的主要方向，其中給排水工程是最為重要的建設內容，每個城市在建設工作中，要立足自身的實際，以城市自身發(fā)展基礎為依據(jù)，統(tǒng)籌各項影響因素，提升海綿工程的技術水平，對其中的難點問題進行有針對性的分析。通過海綿工程的建設，提高雨水資源的利用效率，為城市的健康發(fā)展提供建設的基礎。
參考文獻：
論文摘要 廓清醫(yī)療損害民事責任的構成要件是研究醫(yī)療損害民事責任的前提和關鍵。而對于醫(yī)療損害，醫(yī)療機構一般應承擔民事賠償責任。但在一些特殊情況下，雖然患者有損害，卻可以免除醫(yī)療機構的賠償責任。
論文關鍵詞 醫(yī)療損害民事責任 構成要件 免責事由 侵權責任法 醫(yī)療事故處理條例
廓清醫(yī)療損害民事責任的構成要件是進一步研究醫(yī)療損害民事責任的前提和關鍵。而在醫(yī)療損害民事責任中，免責事由作為一種責任限制的制度設計，對于合理分配責任風險，，維護醫(yī)患雙方的利益平衡，實現(xiàn)公平正義具有重要作用。
一、醫(yī)療損害民事責任的成要件
這里所謂的構成要件，是指構成侵權應當承擔民事賠償責任的必要條件，這些條件必須同時具備?！肚謾嘭熑畏ā返谖迨臈l規(guī)定：“患者在診療活動中受到損害，醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員有過錯的，由醫(yī)療機構承擔賠償責任?！睋?jù)此，醫(yī)療損害民事責任構成要件可以概括如下：
1.患者損害事實的存在。民法上所指的損害，不僅包括物質上的損失，也包括精神上的損失，即“民事權益受到侵害”。作為醫(yī)療損害是指患者在醫(yī)療機構的診療護理過程中，因醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的行為而給患者所造成的利益減少的不良后果，具體表現(xiàn)為患者的死亡、殘疾、增加病痛、延長治療時間等并由此所造成的財產上的減損及患者和家屬精神上的焦慮、憂愁、苦惱等實際損害。
值得一提的是，《醫(yī)療事故處理條例》第4條將醫(yī)療事故分為四級，其中作為兜底條款而對其他造成患者人身損害情形加以涵蓋的第四級醫(yī)療事故界定為“造成患者明顯人身損害的其他后果的”，對應《醫(yī)療事故處理條例》第49條“不屬于醫(yī)療事故的，醫(yī)療機構不承擔賠償責任”的規(guī)定，顯然該規(guī)定顯得過于苛刻。因為我國《民法通則》規(guī)定，只要行為人的過錯造成他人的人身損害，就需要承擔民事責任，并未限定這種傷害必須是“明顯”；此外，有時患者遭受了死亡、殘疾以及器官組織損傷導致功能障礙之外的其他人身損害的，雖然此種損害非常嚴重但需經(jīng)過一定的時間才能顯現(xiàn)出來，而依《醫(yī)療事故處理條例》卻可能構不成醫(yī)療事故從而得不到相應賠償。而《侵權責任法》將其修正為只要“患者在診療活動中受到損害”，在醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員有過錯的前提下，醫(yī)療機構就將承擔賠償責任。很明顯，《侵權責任法》的規(guī)定對患者而言更加合理而人性化。
2.醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員有過錯。這也是醫(yī)療主體承擔醫(yī)療損害責任的歸責原則和最終要件。法律概念里的過錯包括故意和過失兩種形式，但在醫(yī)療損害民事責任中，醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的過錯只有過失一種形式，即在醫(yī)療損害民事責任中，患者的損害事實只能是由醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的過失造成的。因為如果醫(yī)療機構及醫(yī)務人員由于主觀故意造成患者損害后果的，就構成了故意傷害或故意殺人，屬于刑事責任，應由《刑法》來調整，當不在醫(yī)療損害民事責任的范疇內。醫(yī)療損害中的過失，包括疏忽大意的過失和過于自信的過失兩種。對于醫(yī)療機構及醫(yī)務人員主觀上是否有過失應以其所應盡的注意義務為標準，同時也要綜合考慮醫(yī)療環(huán)境、醫(yī)療嘗試及醫(yī)學的發(fā)展現(xiàn)況。
在醫(yī)患關系中由于雙方所處地位關系的特殊性，醫(yī)療機構及醫(yī)務人員主觀上是否存在過錯適用舉證責任倒置原則。同時《侵權責任法》又明確加以規(guī)定“因下列情形之一的，推定醫(yī)療機構有過錯：（一）違反法律、行政法規(guī)、規(guī)章以及其他有關診療規(guī)范的規(guī)定；（二）隱匿或者拒絕提供與糾紛有關的病歷資料；（三）偽造、篡改或者銷毀病歷資料?！?/p>
3.患者的損害事實與醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的過錯之間具有因果關系。醫(yī)療損害必須與醫(yī)療行為之間存在必然的因果關系，否則醫(yī)療行為便不存在損害事實。因果關系是確定醫(yī)療損害民事責任的必要條件之一，如果患者的損害事實與醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的主觀過錯間沒有因果關系，那么醫(yī)療機構及醫(yī)務人員就不承擔民事賠償責任。
需要說明的是，這里的因果關系并非僅限定于直接因果關系。因為如果依直接因果關系的要求，如果醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的行為是患者受損害的間接原因時，醫(yī)療機構就無需承擔責任。這顯然是有失公平的。因為盡管間接原因只是對結果的發(fā)生具有某種可能性，但其本身仍然屬于造成結果發(fā)生的原因之一，并非完全沒有關聯(lián)，況且直接原因與間接原因在一定條件與環(huán)境下還可以相互轉化。事實上，因果關系中既存在一因一果的的簡單情形，更大量存在一因多果、多因一果或多因多果等復雜情形。醫(yī)療損害本身就是患者自身體質、醫(yī)學技術水平、醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的行為、法律的適用等多項復雜因素交錯其中的問題，簡單地依據(jù)原因力去區(qū)分所謂的直接原因與間接原因很難做到。因此，只要醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的過失行為與患者的損害結果之間有因果關系存在，就應依法承擔相應的民事責任。
一般而言，在醫(yī)療損害訴訟中，要證明患者在醫(yī)療過程中死亡、殘疾及其他損害后果較為容易，但要證明患者所受的損害后果是醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的醫(yī)療診治行為所致，即二者存在因果關系，對于一般患者而言，很難以證據(jù)證明。因此同是否具有醫(yī)療過錯舉證責任一樣，對其也采取舉證責任倒置原則，即由醫(yī)療機構證明其醫(yī)療行為與患者人身損害之間不存在因果關系。如醫(yī)療機構舉證不能就應認定二者具有因果關系，醫(yī)療機構應承擔損害賠償責任。對此，最高人民法院2001年12月公布的《最高人民法院關于民事訴訟證據(jù)的若干規(guī)定》第4條明確規(guī)定：“因醫(yī)療行為引起的侵權訴訟，由醫(yī)療機構就醫(yī)療行為與損害后果之間不存在因果關系及不存在醫(yī)療過錯承擔舉證責任?！?/p>
二、醫(yī)療損害民事責任的免責事由
對于醫(yī)療損害，醫(yī)療機構一般應承擔民事賠償責任。但在一些特殊情況下，雖然患者有損害，醫(yī)療機構卻可以免責。對此，《侵權責任法》和《醫(yī)療事故處理條例》都作出了相應規(guī)定。《侵權責任法》第60條明確規(guī)定：“患者有損害，因下列情形之一的，醫(yī)療機構不承擔賠償責任：（一）患者或者其近親屬不配合醫(yī)療機構進行符合診療規(guī)范的診療；（二）醫(yī)務人員在搶救生命垂危的患者等緊急情況下已經(jīng)盡到合理診療義務；（三）限于當時的醫(yī)療水平難以診療。前款第一項情形中，醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員也有過錯的，應當承擔相應的賠償責任?！薄肚謾嘭熑畏ā吩谶@里提到了三種情形下醫(yī)療損害民事責任的免責事由。筆者認為除此之外，《醫(yī)療事故處理條例》第33條所規(guī)定的的六種不屬于醫(yī)療事故的情形，在一定條件下仍然可以作為醫(yī)療損害民事責任的免責事由。事實上，《侵權責任法》第60條就是對《醫(yī)療事故處理條例》第33條的第（五）、第（一）及第（三）項的進一步完善。此外，依據(jù)相關法律法規(guī)，在特定情況下仍不乏醫(yī)療損害民事責任的免責事由。在此，筆者一并作如下論述：
1.患者或者其近親屬不配合醫(yī)療機構進行符合診療規(guī)范的診療從而導致患者損害的醫(yī)療機構免責?；颊叩结t(yī)療機構就醫(yī)是患者的權利，同樣患者就醫(yī)后，配合醫(yī)療機構進行符合診療規(guī)范的、必要的醫(yī)學常規(guī)檢查及診治等診療活動是患者及其近親屬的義務，這樣做的目的最終也符合患者的診療利益。但是，如果是由于患者及其近親屬的不予配合而延誤診療導致不良后果的，則患者的不良后果與醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員的行為之間沒有因果關系，醫(yī)療機構對此損害不應承擔賠償責任。這里所謂患者及其近親屬的不予配合是指其主觀上具有過錯，具體表現(xiàn)為故意或過失行為。當然如果醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員對這種不良后果的發(fā)生也有過錯的，則不能完全免除醫(yī)療機構的賠償責任，而只能適當減輕賠償責任。此時應依醫(yī)療機構及醫(yī)務人員在不良后果的產生中所起的作用（原因力的大?。﹣泶_定其相應的賠償責任。
2.醫(yī)務人員在搶救生命垂危的患者等緊急情況下已經(jīng)盡到合理診療義務的醫(yī)療機構免責。對生命垂危急需搶救的患者而言，“時間就是生命”。這里所謂的“緊急情況”必須具備兩個構成要件：其一是必須情況緊急，患者存在生命危險，這種危險迫在眉睫；其二是此時的緊急醫(yī)療措施應當是限于迫不得已，即當時沒有任何其它更好的救助措施可以實施，醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員已經(jīng)盡到合理診療義務。反之，如果在救助的時候，明顯存在對患者來說可能更好的救助措施和方法，而醫(yī)務人員卻采用了給患者造成損害的醫(yī)療措施，即對這種損害的造成具有故意或重大過失，則醫(yī)療機構當然應對患者的損害后果承擔相應的責任。
3.限于當時的醫(yī)療水平難以診療的醫(yī)療機構免責。即在當時醫(yī)學科學技術條件下，發(fā)生無法預料或者不能防范的不良后果。從理論上講，醫(yī)學科學技術水平的發(fā)展是永遠滯后于醫(yī)療實際需要的。因此，在醫(yī)療活動中，由于受科學技術發(fā)展水平的限制，可能會發(fā)生無法預料或不能防范的不良后果，如并發(fā)癥、副作用等。這些不良后果是醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員在主觀上無法預料的，即使預料到了也不能預防，既主觀上無過失。
4.在醫(yī)療活動中，由于患者病情異?；蛘呋颊唧w質特殊而發(fā)生醫(yī)療意外的醫(yī)療機構免責。因患者病情異常或者患者體質特殊而發(fā)生了不良后果，是否免除醫(yī)療機構的責任，不能一概而論。所謂構成醫(yī)療意外的，是指這種不良后果必須是醫(yī)務人員難以預料和防范的，即醫(yī)務人員已盡到注意義務仍不能避免發(fā)生損害后果的才能免除責任。而如果醫(yī)務人員明知患者具有特殊體質卻于治療中不加預防而導致不良后果的，則不能免除醫(yī)療機構的責任，既不構成醫(yī)療意外。
論文關鍵詞 醫(yī)療損害民事責任 構成要件 免責事由 侵權責任法 醫(yī)療事故處理條例
廓清醫(yī)療損害民事責任的構成要件是進一步研究醫(yī)療損害民事責任的前提和關鍵。而在醫(yī)療損害民事責任中,免責事由作為一種責任限制的制度設計,對于合理分配責任風險,,維護醫(yī)患雙方的利益平衡,實現(xiàn)公平正義具有重要作用。
一、醫(yī)療損害民事責任的成要件
這里所謂的構成要件,是指構成侵權應當承擔民事賠償責任的必要條件,這些條件必須同時具備?！肚謾嘭熑畏ā返谖迨臈l規(guī)定:“患者在診療活動中受到損害,醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員有過錯的,由醫(yī)療機構承擔賠償責任?！睋?jù)此,醫(yī)療損害民事責任構成要件可以概括如下:
1.患者損害事實的存在。民法上所指的損害,不僅包括物質上的損失,也包括精神上的損失,即“民事權益受到侵害”。作為醫(yī)療損害是指患者在醫(yī)療機構的診療護理過程中,因醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的行為而給患者所造成的利益減少的不良后果,具體表現(xiàn)為患者的死亡、殘疾、增加病痛、延長治療時間等并由此所造成的財產上的減損及患者和家屬精神上的焦慮、憂愁、苦惱等實際損害。
值得一提的是,《醫(yī)療事故處理條例》第4條將醫(yī)療事故分為四級,其中作為兜底條款而對其他造成患者人身損害情形加以涵蓋的第四級醫(yī)療事故界定為“造成患者明顯人身損害的其他后果的”,對應《醫(yī)療事故處理條例》第49條“不屬于醫(yī)療事故的,醫(yī)療機構不承擔賠償責任”的規(guī)定,顯然該規(guī)定顯得過于苛刻。因為我國《民法通則》規(guī)定,只要行為人的過錯造成他人的人身損害,就需要承擔民事責任,并未限定這種傷害必須是“明顯”;此外,有時患者遭受了死亡、殘疾以及器官組織損傷導致功能障礙之外的其他人身損害的,雖然此種損害非常嚴重但需經(jīng)過一定的時間才能顯現(xiàn)出來,而依《醫(yī)療事故處理條例》卻可能構不成醫(yī)療事故從而得不到相應賠償。而《侵權責任法》將其修正為只要“患者在診療活動中受到損害”,在醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員有過錯的前提下,醫(yī)療機構就將承擔賠償責任。很明顯,《侵權責任法》的規(guī)定對患者而言更加合理而人性化。
2.醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員有過錯。這也是醫(yī)療主體承擔醫(yī)療損害責任的歸責原則和最終要件。法律概念里的過錯包括故意和過失兩種形式,但在醫(yī)療損害民事責任中,醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的過錯只有過失一種形式,即在醫(yī)療損害民事責任中,患者的損害事實只能是由醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的過失造成的。因為如果醫(yī)療機構及醫(yī)務人員由于主觀故意造成患者損害后果的,就構成了故意傷害或故意殺人,屬于刑事責任,應由《刑法》來調整,當不在醫(yī)療損害民事責任的范疇內。醫(yī)療損害中的過失,包括疏忽大意的過失和過于自信的過失兩種。對于醫(yī)療機構及醫(yī)務人員主觀上是否有過失應以其所應盡的注意義務為標準,同時也要綜合考慮醫(yī)療環(huán)境、醫(yī)療嘗試及醫(yī)學的發(fā)展現(xiàn)況。
在醫(yī)患關系中由于雙方所處地位關系的特殊性,醫(yī)療機構及醫(yī)務人員主觀上是否存在過錯適用舉證責任倒置原則。同時《侵權責任法》又明確加以規(guī)定“因下列情形之一的,推定醫(yī)療機構有過錯:(一)違反法律、行政法規(guī)、規(guī)章以及其他有關診療規(guī)范的規(guī)定;(二)隱匿或者拒絕提供與糾紛有關的病歷資料;(三)偽造、篡改或者銷毀病歷資料?！?/p>
3.患者的損害事實與醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的過錯之間具有因果關系。醫(yī)療損害必須與醫(yī)療行為之間存在必然的因果關系,否則醫(yī)療行為便不存在損害事實。因果關系是確定醫(yī)療損害民事責任的必要條件之一,如果患者的損害事實與醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的主觀過錯間沒有因果關系,那么醫(yī)療機構及醫(yī)務人員就不承擔民事賠償責任。
需要說明的是,這里的因果關系并非僅限定于直接因果關系。因為如果依直接因果關系的要求,如果醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的行為是患者受損害的間接原因時,醫(yī)療機構就無需承擔責任。這顯然是有失公平的。因為盡管間接原因只是對結果的發(fā)生具有某種可能性,但其本身仍然屬于造成結果發(fā)生的原因之一,并非完全沒有關聯(lián),況且直接原因與間接原因在一定條件與環(huán)境下還可以相互轉化。事實上,因果關系中既存在一因一果的的簡單情形,更大量存在一因多果、多因一果或多因多果等復雜情形。醫(yī)療損害本身就是患者自身體質、醫(yī)學技術水平、醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的行為、法律的適用等多項復雜因素交錯其中的問題,簡單地依據(jù)原因力去區(qū)分所謂的直接原因與間接原因很難做到。因此,只要醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的過失行為與患者的損害結果之間有因果關系存在,就應依法承擔相應的民事責任。
一般而言,在醫(yī)療損害訴訟中,要證明患者在醫(yī)療過程中死亡、殘疾及其他損害后果較為容易,但要證明患者所受的損害后果是醫(yī)療機構及醫(yī)務人員的醫(yī)療診治行為所致,即二者存在因果關系,對于一般患者而言,很難以證據(jù)證明。因此同是否具有醫(yī)療過錯舉證責任一樣,對其也采取舉證責任倒置原則,即由醫(yī)療機構證明其醫(yī)療行為與患者人身損害之間不存在因果關系。如醫(yī)療機構舉證不能就應認定二者具有因果關系,醫(yī)療機構應承擔損害賠償責任。對此,最高人民法院2001年12月公布的《最高人民法院關于民事訴訟證據(jù)的若干規(guī)定》第4條明確規(guī)定:“因醫(yī)療行為引起的侵權訴訟,由醫(yī)療機構就醫(yī)療行為與損害后果之間不存在因果關系及不存在醫(yī)療過錯承擔舉證責任?！?/p>
二、醫(yī)療損害民事責任的免責事由
對于醫(yī)療損害,醫(yī)療機構一般應承擔民事賠償責任。但在一些特殊情況下,雖然患者有損害,醫(yī)療機構卻可以免責。對此,《侵權責任法》和《醫(yī)療事故處理條例》都作出了相應規(guī)定?！肚謾嘭熑畏ā返?0條明確規(guī)定:“患者有損害,因下列情形之一的,醫(yī)療機構不承擔賠償責任:(一)患者或者其近親屬不配合醫(yī)療機構進行符合診療規(guī)范的診療;(二)醫(yī)務人員在搶救生命垂危的患者等緊急情況下已經(jīng)盡到合理診療義務;(三)限于當時的醫(yī)療水平難以診療。前款第一項情形中,醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員也有過錯的,應當承擔相應的賠償責任?！薄肚謾嘭熑畏ā吩谶@里提到了三種情形下醫(yī)療損害民事責任的免責事由。筆者認為除此之外,《醫(yī)療事故處理條例》第33條所規(guī)定的的六種不屬于醫(yī)療事故的情形,在一定條件下仍然可以作為醫(yī)療損害民事責任的免責事由。事實上,《侵權責任法》第60條就是對《醫(yī)療事故處理條例》第33條的第(五)、第(一)及第(三)項的進一步完善。此外,依據(jù)相關法律法規(guī),在特定情況下仍不乏醫(yī)療損害民事責任的免責事由。在此,筆者一并作如下論述:
1.患者或者其近親屬不配合醫(yī)療機構進行符合診療規(guī)范的診療從而導致患者損害的醫(yī)療機構免責。患者到醫(yī)療機構就醫(yī)是患者的權利,同樣患者就醫(yī)后,配合醫(yī)療機構進行符合診療規(guī)范的、必要的醫(yī)學常規(guī)檢查及診治等診療活動是患者及其近親屬的義務,這樣做的目的最終也符合患者的診療利益。但是,如果是由于患者及其近親屬的不予配合而延誤診療導致不良后果的,則患者的不良后果與醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員的行為之間沒有因果關系,醫(yī)療機構對此損害不應承擔賠償責任。這里所謂患者及其近親屬的不予配合是指其主觀上具有過錯,具體表現(xiàn)為故意或過失行為。當然如果醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員對這種不良后果的發(fā)生也有過錯的,則不能完全免除醫(yī)療機構的賠償責任,而只能適當減輕賠償責任。此時應依醫(yī)療機構及醫(yī)務人員在不良后果的產生中所起的作用(原因力的大小)來確定其相應的賠償責任。
2.醫(yī)務人員在搶救生命垂危的患者等緊急情況下已經(jīng)盡到合理診療義務的醫(yī)療機構免責。對生命垂危急需搶救的患者而言,“時間就是生命”。這里所謂的“緊急情況”必須具備兩個構成要件:其一是必須情況緊急,患者存在生命危險,這種危險迫在眉睫;其二是此時的緊急醫(yī)療措施應當是限于迫不得已,即當時沒有任何其它更好的救助措施可以實施,醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員已經(jīng)盡到合理診療義務。反之,如果在救助的時候,明顯存在對患者來說可能更好的救助措施和方法,而醫(yī)務人員卻采用了給患者造成損害的醫(yī)療措施,即對這種損害的造成具有故意或重大過失,則醫(yī)療機構當然應對患者的損害后果承擔相應的責任。
3.限于當時的醫(yī)療水平難以診療的醫(yī)療機構免責。即在當時醫(yī)學科學技術條件下,發(fā)生無法預料或者不能防范的不良后果。從理論上講,醫(yī)學科學技術水平的發(fā)展是永遠滯后于醫(yī)療實際需要的。因此,在醫(yī)療活動中,由于受科學技術發(fā)展水平的限制,可能會發(fā)生無法預料或不能防范的不良后果,如并發(fā)癥、副作用等。這些不良后果是醫(yī)療機構及其醫(yī)務人員在主觀上無法預料的,即使預料到了也不能預防,既主觀上無過失。
4.在醫(yī)療活動中,由于患者病情異常或者患者體質特殊而發(fā)生醫(yī)療意外的醫(yī)療機構免責。因患者病情異常或者患者體質特殊而發(fā)生了不良后果,是否免除醫(yī)療機構的責任,不能一概而論。所謂構成醫(yī)療意外的,是指這種不良后果必須是醫(yī)務人員難以預料和防范的,即醫(yī)務人員已盡到注意義務仍不能避免發(fā)生損害后果的才能免除責任。而如果醫(yī)務人員明知患者具有特殊體質卻于治療中不加預防而導致不良后果的,則不能免除醫(yī)療機構的責任,既不構成醫(yī)療意外。
論文關鍵詞：北京私家園林,海綿城市,理水,風景園林
經(jīng)實地考察與歷史資料匯總，總結了北京西郊八處私家園林的歷史演變和水系的景觀結構。
1.1 北京市西郊私家園林歷史演變
承澤園，始建于雍正三年（1725），沒落于（1911），為清果親王允禮的園林；蔚秀園，始建時間不詳，最早記為載為道光十六年（1836），沒落于咸豐十年（I860），為清定郡王載銓的園林；淑春園，始建時間不詳，最早記載為康熙二十六年（1687），沒落于咸豐十年（1860），為清大臣和珅的宅園；鳴鶴園，始建時間不詳，最早記載為嘉慶七年（1802），于咸豐十年（1860）沒落，是清惠親王愉的宅園；鏡春園，始建時間不詳，最早記載為嘉慶七年（1802），于咸豐十年（1860）沒落，屬清莊靜公主；朗潤園，始建時間不詳，最早記載為嘉慶年間（1795）民國初年（1912）改建，屬清慶郡王瑤；勺園，始建于萬歷40年（1612）至42年（1614）年間，咸牟十年（1860）沒落，屬明官員米萬鐘；治貝子園，始建時間不詳，最早記載為光緒中葉（1871-1908），宣統(tǒng)八年（1916）沒落，屬淸貝子載治。
1.2 北京市西郊私家園林水系結構
承澤園在昆明湖二龍閘出水口和萬泉河的匯合之處，園內從西向東有兩條河縱貫全園。蔚秀園從南引萬泉河水入園，全園湖面約十余處，大小形狀各不相同，形成回環(huán)水系。淑春園屬原永定河的古河道，以“水”為脈，全園都分局著分散的水面，水景變化多端。鳴鶴園的水面富于變化，東側較規(guī)則有序，西側相較更為自由活潑，顯示了傳統(tǒng)園林的多層次變化。鏡春園建筑位于中央，四周湖水圍繞，全園觀景以靜觀為主，動觀輔之。朗潤園布局則為曲水和土山環(huán)繞全園，中心形成一島，建筑集中修剪于島上，四面臨水。勺園景觀以水景為主，水面或堤橋分隔，或環(huán)水而筑，形成許多不同水景空間。治貝子園設置轆車盧轉井，通過這種工程向石槽注水，形成“曲水流觴”之美景。
2 北京市西郊私家園林的理水藝術
楊鴻勛先生在《江南園林論》中總結傳統(tǒng)園林理水藝術，有池塘、湖泊、溪流、江河、濠濮、泉水等類型[1]。北京私家園林的水景可歸入以上類型之中。
2.1 池塘型水系
池塘型水系是簡單的水池，多為長方形，顯出人工氣息和靜謐氛圍。如半畝園早先的方池，寸園內形如硯臺的小池“硯沼”都是屬于這一類型。再如鳴鶴園和蔚秀園中都設有獨立的金魚池。另外，許多的京城宅園的設計中常在庭院內設一“月牙河”，形狀似彎月，如崇禮宅園、馬家花園等。
2.2 湖泊型水系
湖泊型的水系在北京私園中也經(jīng)常出現(xiàn)，其大小各不相等。但無論大小，其岸大多都是曲折蜿蜒，且多為疊石形成駁岸。湖泊型的水系經(jīng)常做源頭和尾流以及水灣等部位，同時在端頭架設小橋，形成更豐富的層次，如可園、那家花園、蓮園等。大湖當中還要設置島嶼、長堤、水灘，從而形成更為豐富的景深，小學德育論文如淑春園、鳴鶴園，都是富有自然流轉之意的。同時，與中國自然地形的呼應，北京園林的水系流向也經(jīng)常是以西北為源頭，流向東南的。
2.3 溪流型水系
溪流即蜿蜒的較狹窄的河道，許多花園都用它繞假山、亭榭，增加趣味。如藏園東部就有溪流潺潺而下，再如意園內也有小溪曲折縈繞。清華園、達園均設長溪流經(jīng)全園，以此彰顯水脈漫長，源源不盡。
2.4 濠濮型水系
濠濮型的水系可概括為兩側山巒疊石夾一水的形態(tài)。京郊規(guī)模較大的私家園林，如勺園、清華園、自怡園、朗潤園、蔚秀園等，擁有變化繁復的水景，可泛舟游覽。園中之水與人工假山通?；ハ嘁锌?，相輔相成。山水的關系最常見的有兩種，一種是山與水彼此獨立，疊石位于水池的盡頭，山體走勢與水的流向垂直，并與主建筑遙遙相對，形成“遠山”的效果，如張伯駒的似園。另一種是山水彼此平行展開，咫尺相望，似有無盡之感，如清代西郊清華園北部山池、 民國禮士胡同李家花園后院石池等[2]。
3 對海綿城市建設的啟示
3.1 功能完善的水系統(tǒng)
小水系聯(lián)合形成大水系，大水系之間再聯(lián)合形成更大的水網(wǎng)。在整個體系中，每一個私家園林就像是組織，其中的各個水面就像是細胞，而三山五園地區(qū)就像是器官，整個城市就像是個體。細胞組成組織，組織形成器官，器官又組成人體。由此可見，要實現(xiàn)海綿城市，就要一步一步細化，將整個城市的“吸水”落實到每一個雨水花園細胞的“吸水”。完整的水網(wǎng)結構建立之后，還要求水體有完善的功能。城市的低洼地，可以學習古典園林，就近收集滯留雨水。同時人工修建的排水溝渠是地面上的排水系統(tǒng)，保證雨水就近排放。城外的自然大河可為城市提供充足的水源，與大海相連的，則可以調控整個城市的水量。在整個過程中，暗溝主要用于人口密集的區(qū)域，大多在雨洪排放的起始段設置，路邊的排水溝渠相互勾連，引導雨水進入城內的排水河道。這些河道應具有較強的蓄水作用，足以抵御暴雨徑流所帶來的威脅。
3.2 富有詩意的景觀
在中國傳營造中，雨水基設施的功能、形式與文化相得益彰，是傳統(tǒng)文化價值取向的表現(xiàn)[3]。北京西郊的私家園林，是園林，也是水網(wǎng)系統(tǒng)，擔任著北京市水源地這一角色，其主要功能在于蓄水，大到城市當中的主要蓄水區(qū)，小到一個雨水花園的蓄水區(qū)，都可以在進行借鑒。在滿足工程目的的同時，融入設計師的思考，使海綿城市上升一個層次，成為山水城市。同時不應盲目的挖湖堆山，大興土木，違背園林的初衷。
4 總結
海綿城市建設，應先分析自然水文變化過程，通過對水系的完整規(guī)劃整理，保證水系網(wǎng)絡完整性和水體功能的完善度。在滿足水域的面積，河網(wǎng)的密度的同時營造兼有游賞和調蓄雨洪雙重功能的城市空間。城市園林綠地應在改善城市環(huán)境條件的同時形成富有詩意的綠地景觀，構建山水城市特色人居環(huán)境。孟兆禎院士說，園林建設是“從來多古意，可以賦新詩。”[4]在海綿城市建設的背景下，我們應借鑒古代北京城市水系規(guī)劃與建設的優(yōu)秀經(jīng)驗，變管網(wǎng)排水系統(tǒng)為綜合治理。增加水道、濕地的面積，恢復河網(wǎng)的生態(tài)功能。建設以水定城，注重景觀，水與綠相互結合的海綿城市。
【參考文獻】
[1]楊鴻勛.江南園林論[M].上海：上海人民出版社，1994.
近年來以芽袍衣殼蛋白為分子載體，通過芽袍表而展示技術將外源目的蛋白展示在重組枯草芽袍桿菌芽袍表而，制備具有生物活性的重組芽袍抗體和酶制劑已成為人們研究和關注的熱點。芽袍的結構相當復雜，中心部位為核芯，含有原生質體，被芽袍膜包裹；核芯外而為皮層，成分為肚聚糖，再往外是一層或者數(shù)層蛋白質組成的芽袍殼，最表而為芽袍壁。B. subhfis芽袍中約包含25種衣殼蛋白，而本研究前期已利用CotC為載體成功將海藻糖合酶展示在芽袍表而。但是由于芽袍易受萌發(fā)劑刺激而萌發(fā)，當芽袍萌發(fā)時首先會釋放2,6-毗咤一梭酸鈣CCaz+-dipicolinicacid Caz+-DPA)和大量離子，然后袍子皮層內的肚聚糖被水解，皮層水解會逐漸補充袍子核內的水分，最后芽袍恢復酶活力，導致衣殼蛋白被降解脫落，而海藻糖合酶相應脫落后也會被一些蛋白酶類降解，因此不僅失去了固定化酶的目的，還降低了海藻糖合酶酶活，加大其回收難度。所以，弱化芽袍萌發(fā)，鈍化芽袍對外界環(huán)境刺激的感知變得尤為重要。本研究選擇枯草芽袍桿菌芽袍萌發(fā)中的兩個關鍵皮層溶解酶基因cwlJ和、IeB基因作為敲除對象，實現(xiàn)抑制芽袍萌發(fā)的目的，構建芽袍表而穩(wěn)定展示海藻糖合酶的工程菌，提高芽袍的穩(wěn)定性和利用率，更加高效穩(wěn)定的表而展示海藻糖合酶。
1 材料與方法
1.1 材料與試劑
含有海藻糖合酶基因的枯草芽袍桿菌168(以下簡稱B. subtifis 168-Tres):本實驗室保藏；含有卡那霉素抗性基因的質柳PIC9研口含有博來霉素抗性基因的質粒pPICZaA:杭州寶賽生物科技有限公司；限制性內切酶:日本TakaRa寶生物公司；卡那霉素、博來霉素、Ezup柱式基因組DNA抽提試劑盒、SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒:上海生工生物工程有限公司；高純度質粒小量快速提取試劑盒:艾德萊生物公司；其他試劑均屬于國產分析純。實驗所涉及引物見表1所示。
LB培養(yǎng)基:酵母浸粉5 g/L、蛋白胨10 g/L,氯化鈉10 g/L,pH 7.0-7.4 。
發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖10 g/L、玉米漿10 g/L,酵4浸粉3 g/L, NaCI 6 g/L, K2HP04 3 g/L, MnS04 0.3 g/L, MgS042.4 g/L, pH7.0-7.4 。
菌體增殖培養(yǎng)基:酵母浸粉5 g/L、蛋白陳10 g/L,氯化鈉10 g/L、山梨醇91 g/L o
電轉緩沖液:甘露醇91 g/L、山梨醇91 g/L、甘油100 g/10
菌體復蘇培養(yǎng)基:酵母浸粉5 g/L、蛋白陳10 g/L,氯化鈉10 g/L、甘露醇69 g/L、山梨醇91 g/L。
葡萄糖需在高壓蒸汽滅菌鍋中115℃滅菌20 min其他培養(yǎng)基均121 ℃滅菌20 min。
1.2 儀器與設備
SW – CJ - 2FD型雙人單而凈化工作臺:蘇州凈化設備有限公司；WFJ 7200型可見分光光度計:尤尼柯(上海)儀器有限公司；5 804 R型離心機:德國Eppendorf公司；438℃型電轉儀:德國Eppendorf公司；GNP - 9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱:上海精宏實驗設備有限公司；梯度PCR儀:美國應用生物系統(tǒng)公司；MD2000核酸超微量分光光度計:美國BioFuture公司；ZQYZ - CS型恒溫振蕩培養(yǎng)箱:上海知楚儀器有限公司。
1.3 實驗方法
1.3.1重組同源性片段sleBl-kmr, cwIJ1-zeor的制備
用Ezup柱式基因組DNA抽提試劑盒提取B. subtilis168-Tres菌體的脫氧核糖核酸(deoxyribose nucleic acidDNA)，并以此為模板，sleB F1和sleB R1為引物進行聚合酶鏈反應(polymerise chain reaction PCR)擴增，獲得長度為592 bp用于敲除sleB基因的同源臂sleBl；使用高純度質粒小量快速提取試劑盒提取pPIC9k質粒，以此為模板，sleB F2和sleB R2為引物進行PCR擴增，獲得長度為1 502 bp的卡那霉素抗性基因片段km`；使用SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒膠回收所得的sleB 1片段與kmr片段為模板，sleB F1和sleB R2為引物進行重疊延伸PCR， PCR擴增條件為:（1）95 ℃預變性5 min； 94 ℃變性30 sec, 57 ℃退火30s，72℃延伸3.5 min， 5個循環(huán)；72 ℃延伸2 min； （2） 95 ℃預變性5 min94 ℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸4.5 min, 30個循環(huán)；72℃延伸10 min ， 4℃保存，擴增得到長度為2 094 bp的同源重組片段sleBl -kmr，并使用SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒進行膠回收，保存于-20℃?zhèn)溆谩wlJl長度為451 bp博來霉素抗性基因片段為1 205 bp，cwlJl-zeor片段制備方法同上。Bacillus subtifis 168-TresOsleBΔcwIJ工程菌構建流程見圖1。
1.3.2 回收產物的酶切及濃縮
用限制性內切酶BamH I酶切sleB 1-kmr和 cwLll -zeor基因片段，并向酶切產物中加入1/10體積3 mol/L醋酸鈉和2.5倍體積的無水乙醇，置于-20℃冰箱冷卻20 min，然后12 000 r/min離心5 min得沉淀；加入300 μL體積分數(shù)為75%乙醇重懸沉淀，12 000 r/min離心5 min后除去乙醇,37℃風干30 min最后加入15-20 μLddHZO重懸DNA。使用核酸超微量分光光度計測定回收DNA質量濃度，并最終獲得質量濃度在200-500 ng/μL之間的DNA溶液。
1.3.3 電轉感受態(tài)細胞的制備
挑取新鮮LB固體培養(yǎng)基表而的B. subtifis 168-Tres單菌落，接種于10 mL菌體增殖培養(yǎng)基中，37 ℃,220 r/min培養(yǎng)12h；將上述菌液轉接到50 mL菌體增殖培養(yǎng)基中至菌液初始OD600mm = 0.2，然后37 ℃,220 r/min培養(yǎng)菌體至OD600mm = 1.0；將菌液轉移到100 mL離心管，冰浴10--15 min后，4 ℃ ,8 000 r/min離心5 min，收集菌體；離心后的菌體用預冷的電轉緩沖液洗滌2--3次，并使用1 mL電轉緩沖液重懸菌體，制成枯草芽袍桿菌電轉化感受態(tài)[mo；將制備好的感受態(tài)細胞每管分裝100 μL，-80℃保存?zhèn)溆谩. subtilis 168-TresasleB感受態(tài)的制備方法同上。
1.3.4 電轉化
將回收片段sleBl-kmr與B. subtifis 168-Tres感受態(tài)混合均勻，然后加到2 mm電轉杯中預冷5 min，并使用電轉儀在2 000 V,5 ms條件下電轉化，電轉完成后立即加入500 μL菌體復蘇培養(yǎng)基，37 ℃,180 r/min復蘇培養(yǎng)3h后涂布在含卡那霉素(25 μg/mL)的LB 固體培養(yǎng)基中，于3 7 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-2 d，篩選出抗卡那霉素的菌株。將cwlJl-zeor與B. subtifis 168-TresΔsleB感受態(tài)電轉后，篩選出抗卡那霉素和博來霉素的菌株。
1.3.5 陽性重組菌株的鑒定及傳代培養(yǎng)
挑取陽性轉化子接種到含卡那霉素抗性的液體LB培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)過夜后8 000 r/min離心并收集菌體，提取重組菌DNA，并以獲得的基因組為模板，sleB FZ和sleB凡為引物進行PCR擴增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢驗PCR產物，獲得陽性重組菌株B. subtilis 168-TresΔsleBo重組菌B. subtilis168-TresΔsleBΔcwIJ的獲得方法同上。用LB液體培養(yǎng)基將B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在3 7 ℃ , 200 r/min的培養(yǎng)條件下傳代15次，做菌落PCR驗證。
1.3.6 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌芽抱形成檢測
將原始菌株B. subtilis 168-Tre對口重組菌株B. subtilis168-TresΔsleBΔcwIJ以1%的接種量分別接種在發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于37 ℃ , 200 r/min的恒溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,每隔4h取樣，同時利用芽袍染色法對芽袍染色，置油鏡觀察，芽袍呈綠色，菌體成紅色。觀察10個視野的營養(yǎng)細菌與芽袍數(shù)，產芽袍率=芽袍數(shù)/(芽袍數(shù)+營養(yǎng)細胞數(shù))x100%。
1.3.7 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在LB培養(yǎng)基中芽抱萌發(fā)驗證
分別將發(fā)酵48 h后的重組菌與原始菌菌液80℃水浴20 min，立即冰浴，將菌體稀釋后涂布在LB固體培養(yǎng)基中，放置在37 ℃'恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 h，用平板計數(shù)法記錄芽袍萌發(fā)結果。
1.3.8 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在麥芽糖轉化體系中芽抱萌發(fā)驗證
分別取5 mL發(fā)酵48 h后的重組菌與原始菌菌液80 ℃水浴20 min，立即冰浴，與10 mL pH 7.5的磷酸鹽緩沖液配制的終濃度30%的麥芽糖漿混勻后制備成海藻糖合酶的反應體系。將此反應體系置于25 ℃恒溫水浴振蕩搖床中反應12h，每隔4h取樣涂布在LB培養(yǎng)基中，放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 h，用平板計數(shù)法記錄芽袍萌發(fā)結果。
1.3.9 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在麥芽糖轉化體系中海藻糖合酶酶活檢測
分別將發(fā)酵48 h后的重組菌與原始菌發(fā)酵液8 000 r/min離心20 min，棄上清，用去離子水洗滌沉淀2次后并懸浮，加入溶菌酶使其終質量濃度為2 mg/mL后T-37℃放置30 min破壞營養(yǎng)細胞，后經(jīng)8 000 r/min離心10 min，烘干，稱量干菌體質量，最后用去離子水懸浮制得芽袍懸浮液，將5 mL芽袍懸浮液與10 mL pH 7.5的磷酸鹽緩沖液配制的終濃度為30%的麥芽糖漿混勻，制備成海藻糖合酶的反應體系。將此反應體系置于25 ℃'恒溫水浴振蕩搖床中反應12h后，室溫，1 000 r/min離心10 min取上清進行高效液相色譜Chigh performance liquid chromatography HPLC)檢測轉化體系中海藻糖。
HPLC測定色譜條件:Hypersil NHZ色譜柱(300 mmx4.6 mm 、5 μm)；流動相(乙睛冰=3:1，V/功；流速1.0 mL/min；示差折光檢測器:波}}589.3nm；進樣量10 μL；柱溫:40℃。
海藻糖合酶活力定義:在25 ℃ , pH 7.5條件下，每分鐘生成1 μmol海藻糖所需的酶量為一個酶活單位(U)。
2結果與分析
2.1基因敲除片段sleB 1-kmrb勺構建、電轉化及鑒定
以B. subtilis 168-Tres菌體的基因組為模板，sleB F,和sleB R,為引物進行PCR擴增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結果見圖2a。由圖2a可知，在600 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度5 92 bp相符，表明已成功獲得同源臂sleBl；以質粒pPIC9k為模板，sleB F2和sleB R2為引物進行PCR擴增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結果見圖2b。由圖2b可知，在1 500 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度1 502 bp相符，表明成功獲得卡那霉素抗性基因片段kmr；以膠回收制得的sleBl片段與kmr片段為模板，sleB F,和sleB R2為引物進行重疊延伸PCR，得基因敲除片段sleBl-kmr, 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物，結果見圖2c。由圖2c可知，在2 000 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度2 094 bp相符，表明基因敲除片段sleBl -kmr構建成功。
通過乙醇沉淀法濃縮酶切片段后，測得DNA質量濃度為395.63 ng/μL。將10 μL回收片段與100 N.,L B. subtifis168-Tres感受態(tài)細胞混合并電轉，用引物sleB F2和sleB R2對含卡那霉素平板上生長的菌落基因組進行驗證，結果如圖2d所示，表明sleBl-kmr與sleB發(fā)生同源重組，完成sleB基因的敲除，獲得B. subtifis 168-TresΔsleB重組菌。
2.2基因敲除片段cwlJl-zeor的構建、電轉化及鑒定
以B. subtilis 168-Tres菌體的基因組為模板，cw1J F1和cw1J R1為引物進行PCR擴增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測結果見圖3a。由圖3a可知，在500 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長451 bp相符，表明已成功獲得同源臂cwlJl；以質粒pPICZaA為模板，使用引物cw1J F2和cw1J R2進行PCR擴增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測結果見圖3b。由圖3b可知，在1200 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度1 205 bp相符，表明成功獲得博來霉素抗性基因片段zeor；以膠回收制得的cwlJl片段和zeor片段為模板，cw1J F1和cw1J R2為引物進行重疊延伸PCR，得基因敲除片段cwlJl-zeor, 1%瓊脂糖凝膠電泳檢驗結果見圖3c。由圖3c可知，PCR產物，發(fā)現(xiàn)在1 700 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度1 656 bp相符，表明基因敲除片段cwlJl-zeor構建成功。
通過乙醇沉淀法濃縮酶切片段后，測得DNA質量濃度為378.26 ng/μL。將10 μL回收片段與100 N.,L B. subtilis168-TresasleB感受態(tài)細胞混合并電轉，用引物cw1J F2和cw1J凡對含km和zeo平板上生長的菌落基因組進行驗證，結果如圖3d所示，表明cwLll-zeor與cwlJ發(fā)生同源重組，完成cwlJ纂因的敲除，獲得B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌。
2.3 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌傳代培養(yǎng)驗證結果
B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌第5,10,15次傳代后的菌落PCR產物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測結果見圖40由圖4可知，第5,10,15次傳代在1 500 bp和1 200 bp都有條帶產生，與Icm和zeor的理論值相符，表明重組菌的遺傳穩(wěn)定性并未發(fā)生變化。
2.4 sleB, cwlJ基因雙敲除后對芽袍形成的影響
通過顯微鏡計數(shù)法計算原始菌株B. subtilis 168-Tres與重組菌B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ芽袍率，結果見圖5.由圖5可知，重組菌株比原始菌株生長遲緩約4 h,但兩株菌在48 h后的芽袍形成率都約為88%，證明敲除sleB和cwlJ基因后會使菌體生長時間延遲，但芽袍形成率未發(fā)生變化。
2.5 B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在LB培養(yǎng)基中芽袍萌發(fā)驗證
通過平板計數(shù)法對原始菌株和重組菌株芽袍萌況進行比較，結果見圖6。由圖6可知，B. subtifis 168-Tres芽袍萌發(fā)數(shù)為4.9x10 CFU/mL, B. subtifis 168-TresΔsleB芽袍萌發(fā)數(shù)為5.3 x104 CFU/mL, B. subtilis 168-TresΔcwlJ芽袍萌發(fā)數(shù)為2.1x107 CFU/mL, B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ芽袍未見萌發(fā)。
2.6 B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在麥芽糖轉化體系中芽袍萌發(fā)驗證
通過平板計數(shù)法對原始菌株B. subtifis 168-Tres和重組菌株B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ在麥芽糖轉化體系中的芽袍萌況進行比較，結果見圖7。由圖7可知，原始菌株在麥芽糖轉化體系中轉化4h,8h,12h,16h后的芽袍萌發(fā)數(shù)都為4.8x108CFU/mL左右，而重組菌株芽袍在各個時段一直未見萌發(fā)。
2.7 B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在麥芽糖轉化體系中海藻糖合酶酶活檢測
為了證實B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌海藻糖合酶酶活是否有所提高，利用HPLC對重組菌芽袍懸浮液進行海藻糖合酶檢測，結果見圖8。由圖8可知，用B. subtifis168-Tres原始菌芽袍轉化測得的海藻糖合酶酶活為5.83 U}用B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌芽袍轉化測得的海藻糖合酶酶活為10.42 U}重組菌比原始菌酶活提高了78.7%，這表明敲除、IeB和cwlJ基因后弱化了芽袍萌發(fā)，成功提高了芽袍表而展示海藻糖合酶的穩(wěn)定性。
3 結論
