摘要：為探討中國綠水螅(Hydra sinensis)抗壞血酸過氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中國綠水螅APX基因的全長cDNA序列。該cDNA序列總長1357 bp,包括5′非編碼區(qū)107 bp,3′非編碼區(qū)146 bp及開放閱讀框(Open reading frame,ORF)1104 bp,共編碼367個氨基酸,預測蛋白質分子量為40.79 kD。BLAST結果表明中國綠水螅APX蛋白同源序列絕大部分來自植物界;通過最大似然法(Maximum-likelihood)和貝葉斯分析(Bayesian inference)進行的系統(tǒng)發(fā)生分析顯示植物界及動物界物種的APX序列各自形成單系群。把APX基因ORF全長序列克隆到原核表達質粒pET-GST中,重組質粒轉化E.coliBL21(DE3)菌株,IPTG誘導后成功表達重組融合蛋白GST-APX,再使用純化的重組蛋白免疫新西蘭兔制備多克隆抗體用于APX蛋白的免疫印跡分析(Western blotting assay,WB)。在不同光照時長梯度(光強度2000 lx,每天分別光照0、4h、8h、12h、16h、20h及24h)下培養(yǎng)中國綠水螅30d,實時定量PCR(Quantitative real-timePCR,qPCR)及WB檢測結果均表明光照時間較長時(每天光照12h以上)綠水螅APX表達呈現(xiàn)一定程度的上調。在長時間光輻射下水螅體內共生綠藻連續(xù)進行光合作用所累積的大量活性氧能夠擴散到水螅細胞內,此時水螅體內表達上調的APX可能參與清除其細胞內的活性氧。