摘要：目的:構(gòu)建嗜水氣單胞菌十一碳焦磷酸合成酶XreF基因的原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)入大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)高活性的XreF蛋白。方法:從嗜水氣單胞菌中提取基因組DNA,以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,構(gòu)建pPROEX-HTa-XreF重組載體,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)表達(dá)目的蛋白;用鎳離子親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析分離純化目的蛋白XreF;用分析型凝膠過濾柱檢測XreF的聚集狀態(tài)。結(jié)果:構(gòu)建了重組載體pPROEX-HTa-XreF,測序結(jié)果與XerF基因編碼序列一致;XreF蛋白在大腸桿菌中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)高效表達(dá),純化獲得高濃度(17.5mg/mL)、高純度(96%以上)的XreF蛋白;分析型凝膠過濾結(jié)果顯示,XreF在溶液中為單體,在鎂離子存在的情況下為二聚體。結(jié)論:獲得并純化了在大腸桿菌中高效表達(dá)的嗜水氣單胞菌XreF,鎂離子可誘導(dǎo)XreF在溶液中由單體向二聚體轉(zhuǎn)化。