家蠶ADP/ATP轉(zhuǎn)運(yùn)酶(BmANT)抑制BmNPV增殖作用機(jī)制研究

作者:董戰(zhàn)旗; 蔣亞明; 陳鵬; 潘敏慧 西南大學(xué)家蠶基因組生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 重慶400716; 西南大學(xué)農(nóng)業(yè)部蠶桑生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 重慶400716

摘要:[目的]家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)隸屬于桿狀病毒,需要借助宿主細(xì)胞能量代謝進(jìn)行自身增殖復(fù)制。家蠶ADP/ATP轉(zhuǎn)運(yùn)酶(Bombyx mori ADP/ATP translocase,BmANT)是線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在BmNPV感染條件下和家蠶熱休克蛋白60(heat shock protein 60,BmHSP60)具有直接的相互作用。因此,鑒定Bmant基因在BmNPV感染過程中的功能特征,有助于解析桿狀病毒劫持宿主細(xì)胞因子促進(jìn)自身增殖復(fù)制機(jī)制,完善桿狀病毒和宿主相互作用網(wǎng)絡(luò)。[方法]通過結(jié)構(gòu)域預(yù)測BmANT蛋白的結(jié)構(gòu)特征,熒光定量PCR分析Bmant基因在BmNPV感染后的變化特征;并過表達(dá)BmANT檢測其對病毒DNA復(fù)制和病毒蛋白表達(dá)變化影響;進(jìn)一步在轉(zhuǎn)錄水平分析Bmant和Bmhsp60基因的調(diào)控關(guān)系;最后通過流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)鑒定Bmant和Bmhsp60基因共同調(diào)控BmNPV增殖復(fù)制的機(jī)制。[結(jié)果] SMART軟件預(yù)測顯示BmANT包含3個線粒體載體結(jié)構(gòu)域,BmNPV感染24 h后Bmant基因持續(xù)下調(diào)表達(dá)。過表達(dá)Bmant基因能夠顯著抑制BmNPV DNA的復(fù)制和VP39蛋白表達(dá)。熒光定量PCR分析顯示Bmant和Bmhsp60基因具有相互拮抗作用,能夠相互抑制轉(zhuǎn)錄。Bmant和Bmhsp60共同過表達(dá)分析顯示,BmANT和BmHSP60共同作用BmNPV能夠抑制病毒的增殖復(fù)制。[結(jié)論]結(jié)果表明,BmANT是一個線粒體載體蛋白,具有顯著的抗病毒作用,能夠下調(diào)Bmhsp60基因表達(dá),并抑制BmNPV增殖復(fù)制。

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