摘要：目的構(gòu)建以乙型腦炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)疫苗株SA14-14-2為基因骨架的乙腦/登革4型嵌合病毒,并分析該嵌合病毒對小鼠的神經(jīng)毒力。方法通過重疊PCR方法擴(kuò)增含有登革病毒4型(DENV-4)H241株prME基因序列和乙型腦炎病毒疫苗株SA14-14-2的NS1蛋白前177個核苷酸的融合片段,用NarI和BglII雙酶切后替換乙型腦炎病毒疫苗株SA14-14-2全長克隆中的相應(yīng)區(qū)域,構(gòu)建成乙腦/登革4型嵌合全長克隆,通過體外轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞獲得嵌合病毒(JEV/DENV-4chimericvirus,JD4)。通過測定嵌合病毒JD4和2個母本株JEVSA14-14-2株及DENV-4H241株蝕斑大小、小鼠腦內(nèi)神經(jīng)毒力和皮下感染入腦能力、乳鼠腦內(nèi)神經(jīng)毒力,比較JD4和母本株之間的差異。通過將JD4在原代地鼠腎(primaryhamsterkidney,PHK)細(xì)胞傳代30次,分析傳代后嵌合病毒的神經(jīng)毒力是否減弱及減弱的程度。結(jié)果測序結(jié)果表明,構(gòu)建的嵌合病毒JD4基因組序列和預(yù)期一致,沒有產(chǎn)生新的位點突變。JD4蝕斑較SA14-14-2明顯偏小,但和DENV-4H241株沒有明顯區(qū)別。JD4對3周齡小鼠具有較強(qiáng)的腦內(nèi)神經(jīng)毒力,和母本株DENV-4H241沒有差異,對小鼠沒有神經(jīng)侵襲力。乳鼠實驗結(jié)果表明,嵌合病毒JD4腦內(nèi)神經(jīng)毒力雖然略低于母本株DENV-4H241,但兩者之間沒有明顯差異,都明顯強(qiáng)于乙腦疫苗株SA14-14-2。在PHK細(xì)胞傳代30次后,小鼠神經(jīng)毒力雖然有所減低,但并不明顯。結(jié)論成功構(gòu)建了嵌合病毒JD4,通過測定并比較JD4與母本株的蝕斑特征、小鼠及乳鼠神經(jīng)毒力等試驗,為分析登革疫苗候選株安全性研究奠定了基礎(chǔ)。