摘要：目的克隆樁蛋白基因(PXN)的蛋白編碼區(qū)并構(gòu)建PXN基因真核表達(dá)載體,建立PXN穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞株,分析PXN基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的作用.方法Trizol法提取肝癌細(xì)胞總RNA并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,PCR法擴(kuò)增PXN基因蛋白編碼區(qū)并構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pEBFP-PXN.脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2,G418篩選培養(yǎng)獲得樁蛋白高表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞株.實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞分析檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)速率,細(xì)胞創(chuàng)傷-愈合實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞遷移速率.蛋白免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)變化.結(jié)果成功克隆PXN基因并構(gòu)建真核表達(dá)載體pEBFP-PXN.獲得樁蛋白高表達(dá)單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞株,胞內(nèi)顯示藍(lán)色熒光,蛋白免疫印跡法顯示穩(wěn)轉(zhuǎn)株內(nèi)表達(dá)外源融合蛋白BFP-PXN.樁蛋白表達(dá)不影響HepG2肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)速率但可以抑制其細(xì)胞遷移,穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞上皮標(biāo)志蛋白E-Cadherin表達(dá)升高、間質(zhì)標(biāo)志物N-Cadherin和Vimentin表達(dá)下降.結(jié)論P(yáng)XN基因不影響HepG2肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速率但可以抑制其細(xì)胞遷移,這可能與其可以影響肝癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志蛋白表達(dá)有關(guān).