摘要：以繼代培養(yǎng)0.5、1.5 a和3.5 a的抗性黑松37#家系胚性愈傷組織為材料,觀察不同培養(yǎng)時間胚性細(xì)胞的形態(tài)和體胚成熟的過程,并對愈傷組織的增殖率、每克愈傷形成的體胚數(shù)量及體胚萌發(fā)率和植株成活率進(jìn)行測定。結(jié)果表明:在繼代培養(yǎng)過程中,胚性胚柄細(xì)胞團(ESM)結(jié)構(gòu)逐漸疏松,胚柄細(xì)胞呈現(xiàn)縮短、增粗的現(xiàn)象;培養(yǎng)時間對抗性黑松愈傷組織的增殖、分化、體胚萌發(fā)及植株成活率均有顯著影響。3種不同培養(yǎng)時間愈傷組織的增殖率分別為200.37%、182.47%和111.63%,每克胚性愈傷組織形成成熟體細(xì)胞胚分別為77、31、5個,萌發(fā)率分別為84.43%、51.10%、11.13%;植株成活率分別為73.00%、50.00%、6.70%,均呈下降趨勢;3種愈傷體胚成熟的時間也存在顯著差異,繼代培養(yǎng)時間越長,體胚分化成熟過程越慢,愈傷組織形成子葉胚的時間最短為46 d,最長為74 d。因此,抗性黑松胚性愈傷組織在繼代培養(yǎng)過程中胚性逐步降低,體胚發(fā)生和植株再生能力下降,短期培養(yǎng)的胚性愈傷組織(0.5 a)為抗性黑松體胚發(fā)生較為理想的初始材料,且愈傷組織繼代培養(yǎng)時間不宜超過1.5 a。