摘要：目的構(gòu)建腦心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)GS01株衣殼蛋白VP1的真核表達載體,并利用酵母真核表達系統(tǒng)獲得具有抗原性的分泌性VP1成熟多肽。方法擴增EMCV GS01株VP1基因,與酵母表達載體pPIC9K重組,構(gòu)建表達質(zhì)粒p PIC9K-VP1;用醋酸鋰轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化酵母菌GS115,在MD平板上篩選重組克隆,用G418快速篩選高拷貝轉(zhuǎn)化子;陽性克隆經(jīng)甲醇誘導(dǎo)表達后,利用SDS-PAGE及Western blot鑒定培養(yǎng)上清中VP1蛋白的表達情況及抗原性。結(jié)果重組質(zhì)粒pPIC9K-VP1經(jīng)酶切及測序鑒定證明構(gòu)建正確,表達的VP1蛋白相對分子質(zhì)量約34 000,為分泌性表達,能被兔抗EMCV鹽析血清特異性識別,具有天然VP1蛋白的反應(yīng)原性。結(jié)論實現(xiàn)了EMCV GS01株VP1蛋白的酵母真核表達,為在體外研究VP1與宿主細胞的相互作用機制及EMCV基因工程疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。