摘要：本試驗旨在探究羊源多殺性巴氏桿菌OmpA基因的原核表達及其生物信息學(xué)特征。以羊源多殺性巴氏桿菌HN-01株基因組為模板,設(shè)計特異性引物擴增OmpA基因;構(gòu)建pET-28a(+)-OmpA重組質(zhì)粒后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞,將鑒定正確的重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達;通過SDS-PAGE及Western blotting分析表達蛋白的特征,并運用生物信息學(xué)工具對OmpA基因序列進行分析。結(jié)果顯示,羊源多殺性巴氏桿菌OmpA基因大小約為1044bp,該基因序列與HN-06株的同源性達89.72%。通過誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn),pET-28a(+)-OmpA重組菌最佳誘導(dǎo)條件為1mmol/LIPTG37℃誘導(dǎo)6h,表達的重組蛋白大小約為40ku,以包涵體的形式存在。Western blotting結(jié)果顯示,約40ku的重組蛋白攜帶His標(biāo)簽。經(jīng)生物信息學(xué)分析,OmpA分子式為C1684H2619N457O505S3,屬堿性疏水蛋白,其多肽鏈的1-21位氨基酸為信號肽區(qū)域,并具有多種結(jié)構(gòu)。綜上所述,OmpA可能具有特殊結(jié)構(gòu),與眾多外膜蛋白結(jié)構(gòu)特點相似。本研究構(gòu)建了多殺性巴氏桿菌OmpA基因原核表達系統(tǒng),優(yōu)化誘導(dǎo)條件后能穩(wěn)定獲得OmpA重組蛋白,為進一步探究巴氏桿菌的致病機理提供理論依據(jù)。