摘要：大熊貓輪狀病毒(giant panda rotavirus,GPRV)是引起幼齡大熊貓腹瀉的主要病原,對(duì)圈養(yǎng)大熊貓產(chǎn)生了較大的危害。輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP6是一種載體蛋白,可介導(dǎo)黏膜免疫反應(yīng)。VP7是輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白中主要的中和抗原。因此,VP6-VP7的融合表達(dá)作為候選抗原對(duì)該病的防治具有重要的意義。傳統(tǒng)大腸埃希菌原核表達(dá)存在表達(dá)量低、可溶性差以及純度低等弊端。本研究使用醛縮酶(EDA)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)3種融合標(biāo)簽,以實(shí)現(xiàn)獲得表達(dá)量高和純度高的GPRV-VP6-VP7重組表達(dá)蛋白。將擴(kuò)增的 VP 6、 VP 7基因片段利用同源重組酶構(gòu)建到含3種融合標(biāo)簽的表達(dá)載體pET21b上,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行低溫誘導(dǎo)表達(dá)。用Ni-柱親和層析法純化目的蛋白,SDS-PAGE和Image J分析蛋白表達(dá)量和可溶性,Western blot分析得到表達(dá)的重組表達(dá)蛋白正確且具有蛋白活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,EDA標(biāo)簽?zāi)茱@著促進(jìn)VP6-VP7蛋白的原核可溶性表達(dá),提高VP6-VP7蛋白表達(dá)量。